DB34T 1374-2011 生鲜乳中三聚氰胺的测定 酶联免疫吸附法
生鲜乳中三聚氰胺的测定—酶联免疫吸附法
1 范围
本标准规定了生鲜乳中三聚氰胺检测的酶联免疫吸附测定方法。
本标准适用于生鲜乳中三聚氰胺的常规快速测定，阳性样品需用气相色谱－质谱法（GC/MS）或液
相色谱质谱法（LC/MS-MS）确证。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 试样制备
采集的生鲜乳应密闭保存于-18℃ 的冰柜中，用前恢复至室温，摇匀，备用。
4 原理
本方法是酶联免疫法中的竞争性测定法，其主要原理是：样品中游离的三聚氰胺与酶标板上固定的
三聚氰胺抗原竞争特异性抗体，通过酶标Ⅱ抗的反应，洗掉游离的酶标物，再通过酶的专一性显色剂显
色，根据显色的深浅来判断样品中三聚氰胺的含量。根据竞争性原理，样品中游离的三聚氰胺少，则酶
标Ⅱ抗结合多，显色就深，相反，则显色浅。结果可以通过在 450 nm 处测定吸收值计算，颜色变化的
程度反映样品中三聚氰胺的含量，在一定浓度范围内吸光度的高低与样品中三聚氰胺的含量成反比。
5 试剂和材料
5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的二级水。
5.2 竞争酶标免疫法三聚氰胺试剂盒，2℃～8℃ 冰箱中保存。
5.2.1 微孔板：包被有三聚氰胺抗原。
5.2.2 三聚氰胺标准溶液：0 ng/mL、10 ng/mL、30 ng/mL、90 ng/mL、270 ng/mL、810 ng/mL。
5.2.3 三聚氰胺酶标Ⅱ抗工作液。
5.2.4 三聚氰胺抗体工作液。
5.2.5 浓缩样本稀释液。
5.2.6 浓缩洗涤液。
5.2.7 底物A液。
5.2.8 底物B液。
5.2.9 终止液。